Hygromycin B 潮霉素B

產(chǎn)品標簽

Hygromycin B潮霉素B；50mg/ml；Hph 潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶；遺傳霉素G418；Blasticidin S 殺稻瘟菌素（滅瘟散）；Zeocin博萊霉素；CAS：31282-04-9

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述
潮霉素B（Hygromycin B），從吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）分離到的一種氨基糖苷類抗生素。通過與30S核糖體亞基結(jié)合，誘導對mRNA模板的錯讀且抑制易位，從而以阻止蛋白合成。潮霉素B能殺死細菌、真菌和高等真核細胞。主要用來篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hph載體的原核細胞或真核細胞（植物細胞和哺乳動物細胞）。
 

對潮霉素B（Hygromycin B）的抗性來源于大腸桿菌潮霉素抗性基因（hph或hyg），該基因能編碼潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（hygromycin phosphotransferase），使得潮霉素B發(fā)生磷酸化從而失去活性。目前Hph抗性基因主要有兩種來源，zui初來源是大腸桿菌（Escherichia coli），另一來源是潮霉素B產(chǎn)生菌吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）。如今，攜帶Hph抗性的載體大多來自大腸桿菌。

我司提供兩種產(chǎn)品形式的潮霉素B。
 

一種以凍干粉形式提供，貨號分別為：MS0003-1G，MS0003-5G，MS0003-10G。需要配制成儲存液后備用。

一種以溶于PBS的無菌液體形式提供，貨號為MS0003-20ML，使用更簡單方便。
 

產(chǎn)品特性
1）   化學名：O-6-Amino-6-deoxy-L-glycero-D-galacto-heptopyranosylidene-(1-2-3)-O-β-D-talopyranosyl(1-5)- 2-deoxy-N3-methyl-D-streptamine
2）   同義名：Hygromycin B, from Streptomyces hygroscopicus 潮霉素質(zhì)B，來源于吸水鏈霉菌

3）   CAS NO：31282-04-9

4）   分子式：C₂₀H₃₇N₃O₁₃

5）   分子量：527.53 g/mol

6）   外觀：類白色至白色粉末

7）   純度：≥90%（HPLC）

8）   效價：≥1050 U/mg

9）化學結(jié)構(gòu)：


 

保存與運輸方法

保存：粉末-20℃干燥保存，2年有效。溶液2-8°C避光保存，1年有效。

運輸：冰袋運輸。

使用方法
1、   儲存液制備

1）潮霉素B（粉末形式）：稱取適量粉末溶于1×PBS配制成50mg/ml溶液，用0.22μm濾膜過濾除菌，置于2-8°C避光保存。

2）潮霉素B（溶液形式）：已是無菌儲存液，直接用細胞培養(yǎng)液稀釋到工作濃度即可使用。

2、   建議工作濃度

潮霉素B用來篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化。1） 哺乳動物細胞 使用濃度為50-1000 μg/ml，常用篩選濃度為200 μg/ml，zuijia濃度需要殺滅曲線來確定2） 植物細胞 常用濃度：20-200 μg/ml；
3）   細菌常用濃度：20-200 μg/ml；
4）   真菌 常用濃度：200-1000 μg/ml；
 

3、殺滅曲線的建立

建議初次實驗一定要建立殺滅曲線（kill curve），至少設(shè)立5個濃度，篩選到適合自身實驗體系的zuijia濃度。
1）   將未轉(zhuǎn)化細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，鋪足夠的孔以保證后續(xù)的梯度實驗。37℃培養(yǎng)過夜；【注意】：對于需要更高密度以保證活力的細胞，增加接種量。
 

2）   第二日，用含梯度濃度潮霉素B的培養(yǎng)基替換舊培養(yǎng)基。比如，哺乳動物細胞常用濃度為50-1000μg/ml，可設(shè)50, 100, 250, 500, 750, 1000μg/m這6個濃度，各3個平行。同時設(shè)置一陰性對照，3個平行。
3）   接下來每3-4日更換新鮮的含抗生素培養(yǎng)基。
4）   按照固定周期（如每2天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)化細胞生長的恰當濃度。選擇在理想天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的zui低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選所需的工作濃度。
 

4、穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞的篩選
1）   轉(zhuǎn)染48h后，用含zuijia篩選濃度潮霉素B的培養(yǎng)基進行細胞傳代?！?strong>注意】：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷效果。當細胞密度過高，篩選效率會降低。為了得到較好的篩選效果，建議將細胞稀釋至豐度不超過25%。
2）   每3-4日更換新鮮的含抗生素培養(yǎng)基。
3）   篩選7天后觀察并評估細胞集落的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這些取決于宿主細胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。
4）   挑取5-10個抗性克隆到35mm細胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5）   之后換用正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
 

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
 

 — — Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

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